RAW264.7+GFP小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記
,RAW264.7 GFP
貨號(hào):YJ-0082a
價(jià)格: 3200.0
規(guī)格: 1*10 6
細(xì)胞描述
此細(xì)胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒,XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性??梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖??梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無(wú)作用。
該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。
細(xì)胞特性
1) 來(lái)源:鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤;單核細(xì)胞;巨噬細(xì)胞
2) 形態(tài):不規(guī)則圓形,紡錘狀,貼壁細(xì)胞,少量懸浮。
3) 含量:>1x106 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
細(xì)胞篩選
該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。
建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。
初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。
細(xì)胞接收后的處理
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)半貼細(xì)胞或貼壁不牢(懸?。┘?xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,若細(xì)胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細(xì)胞生長(zhǎng)70%-90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代,傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1) 準(zhǔn)備DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺,0.11g / L丙酮酸鈉) (推薦YJ-0001)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %;P/S青霉素-鏈霉素 1%。
2) 注意事項(xiàng):
(a)在細(xì)胞生長(zhǎng)的初始階段,細(xì)胞以貼壁的形式生長(zhǎng)并呈現(xiàn)出長(zhǎng)方體的形態(tài)和有“偽足"延伸。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,細(xì)胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長(zhǎng)。細(xì)胞密度達(dá)到一定的程度,會(huì)有細(xì)胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中,鏡下觀察會(huì)發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細(xì)胞會(huì)同時(shí)出現(xiàn)。
(b)該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化。傳代時(shí),用無(wú)菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。(c)該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí),細(xì)胞會(huì)輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起,有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的,在傳代時(shí)應(yīng)收集起來(lái),離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。
(d)血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞貼壁能力變化,應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。
3) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
4) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:
該細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟替代胰酶來(lái)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。用無(wú)菌細(xì)胞刮鏟刮拭細(xì)胞附著培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,收集細(xì)胞后離心去上清,重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。收貨后第一次傳代1:2進(jìn)行,后續(xù)可以根據(jù)實(shí)際的情況以1:2~1:4的比例進(jìn)行傳代。
3) 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
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細(xì)胞熒光染料標(biāo)記檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
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染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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